人外周血淋巴細(xì)胞的產(chǎn)業(yè)化加速升級(jí)
更新時(shí)間：2016-06-15 1260
人外周血淋巴細(xì)胞的產(chǎn)業(yè)化加速升級(jí)
人外周血淋巴細(xì)胞適用于從人抗凝血液中分離單個(gè)核細(xì)胞，主要為淋巴細(xì)胞無菌條件下所分離的細(xì)胞可用于免疫學(xué)檢測(cè)。
人外周血淋巴細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞等細(xì)胞其體積、形態(tài)和密度，與其他細(xì)胞不同，紅細(xì)胞和白細(xì)胞等細(xì)胞密度較大，為1.090g/ml左右，而人外周血淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞密度為1.090 g/ml血小板為1.035 g/ml。為此將葡聚糖(右旋糖酐)和泛影酸葡甲胺按一定比例混合調(diào)整比重、pH值和滲透壓，經(jīng)過澄清及除菌過濾后制成一種密度在1.077g/ml并且近于等滲的溶液，經(jīng)過密度梯度離心使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將各種血細(xì)胞加以分離。
取新鮮抗凝血1ml與注射用生理鹽水1:1 混勻后，小心加于2ml的細(xì)胞分離液之液面上，以400g離心(半徑15cm水平轉(zhuǎn)子)20分鐘，此時(shí)離心管中由上至下細(xì)胞分四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。收集第二層細(xì)胞放入含注射用生理鹽水4-5毫升的試管分混勻后400g離心20分鐘。沉淀經(jīng)反復(fù)洗2次即得所需人外周血淋巴細(xì)胞。
常情況下，人外周血中是沒有分裂相的，只有在異常情況下才能發(fā)現(xiàn)。植物血球凝集素（PHA）是人類淋巴細(xì)胞有絲分裂的刺激劑，在PHA作用下，原處于Go期的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為人外周血淋巴細(xì)胞，進(jìn)而進(jìn)行有絲分裂。利用PHA這一特性，人外周血淋巴細(xì)胞經(jīng)過含有HPA培養(yǎng)液培養(yǎng)，在體外便可獲得豐富的含有絲分裂的生長(zhǎng)活躍的細(xì)胞群體，終止分裂中期的淋巴細(xì)胞，例可得到所需的人體染色體圖形。具有用血量少、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。
人外周血淋巴細(xì)胞適用于從人抗凝血液中分離單個(gè)核細(xì)胞，主要為淋巴細(xì)胞無菌條件下所分離的細(xì)胞可用于免疫學(xué)檢測(cè)。
人外周血淋巴細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞等細(xì)胞其體積、形態(tài)和密度，與其他細(xì)胞不同，紅細(xì)胞和白細(xì)胞等細(xì)胞密度較大，為1.090g/ml左右，而人外周血淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞密度為1.090 g/ml血小板為1.035 g/ml。為此將葡聚糖(右旋糖酐)和泛影酸葡甲胺按一定比例混合調(diào)整比重、pH值和滲透壓，經(jīng)過澄清及除菌過濾后制成一種密度在1.077g/ml并且近于等滲的溶液，經(jīng)過密度梯度離心使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將各種血細(xì)胞加以分離。
取新鮮抗凝血1ml與注射用生理鹽水1:1 混勻后，小心加于2ml的細(xì)胞分離液之液面上，以400g離心(半徑15cm水平轉(zhuǎn)子)20分鐘，此時(shí)離心管中由上至下細(xì)胞分四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。收集第二層細(xì)胞放入含注射用生理鹽水4-5毫升的試管分混勻后400g離心20分鐘。沉淀經(jīng)反復(fù)洗2次即得所需人外周血淋巴細(xì)胞。
常情況下，人外周血中是沒有分裂相的，只有在異常情況下才能發(fā)現(xiàn)。植物血球凝集素（PHA）是人類淋巴細(xì)胞有絲分裂的刺激劑，在PHA作用下，原處于Go期的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為人外周血淋巴細(xì)胞，進(jìn)而進(jìn)行有絲分裂。利用PHA這一特性，人外周血淋巴細(xì)胞經(jīng)過含有HPA培養(yǎng)液培養(yǎng)，在體外便可獲得豐富的含有絲分裂的生長(zhǎng)活躍的細(xì)胞群體，終止分裂中期的淋巴細(xì)胞，例可得到所需的人體染色體圖形。具有用血量少、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。
